掌握BCA法測定 蛋白質 濃度的原理。

 

 

BCA(bicinchonininc acid)與二價銅離子的硫酸銅等其他試劑組成的試劑，混合一起即成為蘋果綠，即BCA工作試劑。在堿性條件下，BCA與蛋白質結合時，蛋白質將Cu2+ 還原為Cu+ ，一個Cu+ 螯合二個BCA分子，工作試劑由原來的蘋果綠形成紫色復合物，*光吸收強度與蛋白質濃度成正比。

 

 

① 繪制標準曲線。

 

② 以測定管吸光度值，查找標準曲線，求出待測血清中蛋白質濃度(g/L)。

 

③ 再從標準管中選擇一管與測定管光密度相接近者，求出待測血清中蛋白質濃度(g/L)。

 

 

① 7220型分光光度計

 

② 恒溫 水浴 箱

 

③ 中試管7支

 

④ 槍式移液管

 

 

①試劑A：1％BCA二鈉鹽；2％無水碳酸鈉；0.16%酒石酸鈉；0.4％氫氧化鈉；0.95％碳酸氫鈉；混合調PH值至11.25。

 

② 試劑B：4％硫酸銅。

 

③ BCA工作液：試劑A 100ml ＋ 試劑B 2ml混合

 

④ 蛋白質標準液：用結晶牛 血清 白蛋白根據其純度用生理鹽水配制成1.5mg/ml的蛋白質標準液。（純度可經凱氏定氮法測定蛋白質含量而確定）

 

⑤ 待測樣品：用雙縮脲測定法的樣品稀釋而成。

 

 

① 操作簡單，快速，45分鐘內完成測定，比經典的Lowary法快4倍且更加方便；

 

② 準確靈敏，試劑穩定性好，BCA試劑的蛋白質測定范圍是20-200μg/ml，微量BCA測定范圍在0.5-10μg/ml。

 

③ 經濟實用，除試管外，測定可在微板孔中就進行，大大節約樣品和試劑用量；

 

④ 抗試劑干擾能力比較強，如去垢劑，尿素等均無影響

 

此法測定 蛋白質 濃度，近些年被科研工作者廣泛選用。總之，雖然蛋白質含量的測定方法很多，但是，還沒有一個完美的方法。在選擇測定方法時，可根據實驗要求和實驗室條件決定。